La serie describe las hazañas de los hermanos Sam y Dean Winchester, interpretados por los actores Jared Padalecki y Jensen Ackles respectivamente, quienes viajan a diversos sitios de Estados Unidos, a bordo de un Chevrolet Impala de color negro y modelo 1967, investigando y combatiendo sucesos paranormales e inexplicables, muchos de ellos basados en leyendas urbanas de la cultura estadounidense, además de criaturas sobrenaturales clásicas, tales como vampiros, licántropos y fantasmas. A lo largo de las siguientes temporadas, la trama se diversifica, dando más importancia a demonios y añadiendo al repertorio mitológico ángeles, cuya aparición desencadena la trama del Apocalipsis judeocristiano que se desarrolló durante dos temporadas y cuyas consecuencias persisten una temporada después. De acuerdo a Eric Kripke, creador de la serie, Supernatural está basado en The Sandman —de Neil Gaiman, American Gods, An American Werewolf in London y El héroe de las mil caras, aunque el apellido "Winchester" el cual utilizan los protagonistas de la serie pudo haberse inspirado en la viuda Sarah Winchester, la cual construyó el lugar más misterioso de todos los Estados Unidos, la Mansión Winchester.
